Fosfatasa alcalina termosensible

Concentración: 1 U/µL

La fosfatasa alcalina termosensible es una nueva fosfatasa alcalina que muestra actividad en tampones de endonucleasas de restricción de uso común, así como en tampones de PCR. Esta enzima cataliza la liberación de grupos fosfato 5' y 3' en ADN, ARN y nucleótidos. Además, puede eliminar grupos fosfato de las proteínas. La fosfatasa alcalina termosensible es capaz de desfosforilar todo tipo de extremos terminales del ADN en 10 minutos a 37 °C. La enzima se inactiva mediante calor a 75 °C en 5 minutos. Por lo tanto, no es necesario eliminar la fosfatasa alcalina antes de la ligación.

Fuente
Cepa de E. coli recombinante que contiene el gen de la fosfatasa alcalina clonado de bacterias.

Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para desfosforilar los extremos 5' de 1 μg de ADN pUC57 linealizado en tampón DSAP a 37 °C en 10 minutos.

Ámbito de aplicación
- Desfosforilación del ADN del vector clonado para evitar la recircularización durante la ligadura.
- Escisión enzimática simultánea y desfosforilación del ADN del vector.
- Purificación de productos de PCR: degradación de nucleótidos de los productos de PCR antes de la secuenciación.
- Desposforilación de los extremos 5' de los ácidos nucleicos antes del marcaje de la polinucleótido quinasa T4.
- Otras aplicaciones que requieran desfosforilación de sustratos de ADN y ARN.
- Desfosforilación de proteínas.