Ligasa de ARN T4

Concentración: 10 U/ µ L 

La ARN ligasa T4 cataliza la formación dependiente de ATP de enlaces fosfodiéster entre los grupos fosfato 5' y los extremos hidroxilo 3' de oligonucleótidos, ARN monocatenario y moléculas de ADN tanto intermolecular como intramolecularmente.

Sustratos mínimos: un nucleótido 3',5'-fosfato en reacciones intermoleculares y un oligonucleótido de 8 nucleótidos en reacciones intramoleculares.

Fuente
La cepa de E. coli recombinante contiene el gen 63 clonado del bacteriófago T4.

Definición de unidad

Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para catalizar la conversión de 1 nmol de 5'-[ ³² P]-(A) _12-18 a su forma resistente al ácido a 37 °C en 30 minutos.

La actividad enzimática se determina en la siguiente mezcla: 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl ₂ , 10 mM DTT, 1 mM ATP y 10 µ M 5'-[ ³² P]-(A) _12-18 (10 µM en el extremo 5').

Ámbito de aplicación
- Marcaje del extremo 3' del ARN (utilizando citidina 3',5'-di[α- ³² P] fosfato)
- Ligadura de ARN a ARN
- Síntesis de oligorribonucleótidos y oligodesoxirribonucleótidos
- Modificación específica del ARNt
- Ligadura de oligodesoxinucleótidos a ADNc monocatenario para 5' RACE (Amplificación Rápida de Extremos de ADNc)
- Generación específica del sitio de complejos de cebadores de PCR