Ligasa de ADN T4

Concentración: 5 Weiss U/ µ L

La ADN ligasa T4 cataliza la formación de enlaces fosfodiéster entre los extremos 5'-fosfato y 3'-hidroxilo yuxtapuestos en ADN o ARN bicatenario. Esta enzima es capaz de reparar cortes monocatenarios en ADN, ARN o híbridos ADN/ARN bicatenarios, y puede unir fragmentos de ADN con extremos adhesivos o romos, pero es inactiva en ácidos nucleicos monocatenarios.

La ADN ligasa T4 requiere ATP como cofactor.

Fuente
Cepa de E. coli recombinante que contiene el gen 30 clonado del bacteriófago T4.

Definición de unidad

A 37 °C , 1 unidad Weiss de enzima cataliza la conversión de 1 nmol de [ ³² PPi] en un estado de adsorción de carbón activado en 20 minutos.

La actividad enzimática se determina en la siguiente mezcla: 66 mM Tris-HCl (pH 7,6), 6,6 mM MgCl ₂ , 0,066 mM ATP, 10 mM DTT, 3,3 μM [ ³² P]ortofosfato (PPi).

Una unidad Weiss equivale aproximadamente a 200 unidades de ligadura de extremos cohesivos (CEU), lo que equivale a la cantidad de fragmentos de ADN digeridos con HindIII que se pueden ligar en 30 minutos a 16 °C . Fragmentos de ADN λ.

Ámbito de aplicación
- Fragmentos de ADN generados mediante la clonación de enzimas de restricción.
- Productos de PCR clonados
- Ligadura de oligonucleótidos bicatenarios o adaptadores al ADN
- Mutagénesis dirigida al sitio
- Polimorfismo de longitud de fragmentos amplificados (AFLP)
- Detección de ARN mediada por ligasa
- Reparación de mellas en ADN bicatenario, ARN o híbridos ADN/ARN
- Autocircularización del ADN lineal