DNasa I, libre de ARNasa, HC

Concentración: 50 U/ µ L

Descripción del Producto
La ADNasa I (sin ARNasa) es una endonucleasa capaz de escindir ADN monocatenario y bicatenario. Hidroliza enlaces fosfodiéster, produciendo desoxirribonucleótidos simples y oligodesoxirribonucleótidos con grupos 5'-fosfato y grupos 3'-OH.
La actividad de esta enzima depende estrictamente del Ca₂₄ y se activa con iones Mg₂₄ o Mn₂₄. En presencia de Mg₂₄, la DNasa I corta cada hebra de ADN bicatenario de forma estadísticamente aleatoria e independiente. En presencia de Mn₂₄, la enzima corta prácticamente ambas hebras de ADN en el mismo sitio, lo que resulta en fragmentos de ADN con extremos romos o salientes de uno o varios nucleótidos.

Fuente
Cepa de E. coli recombinante que contiene el gen clonado que codifica la DNasa I bovina.

Definición de unidad

Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para degradar completamente 1 µg de ADN plasmídico en 1 minuto a 37 °C.

La actividad enzimática se determina en la siguiente mezcla: 10 mM Tris-HCl (pH 7,5 a 25 °C), 2,5 mM MgCl ₂ , 0,1 mM CaCl ₂ y 1 µg de ADN pUC19.

Una unidad de DNasa I equivale a 0,3 unidades Kunitz.

Características
- Enzima recombinante
- Purificado a partir de un huésped no animal, con bajos niveles de ARNasa endógena.

Ámbito de aplicación
- Para la preparación de ARN libre de ADN.
- Para eliminar el ADN molde después de la transcripción in vitro.
- Preparar ARN libre de ADN antes de RT-PCR y RT-qPCR.
- En conjunción con la ADN polimerasa I para el etiquetado del ADN a través de la traducción de mellas.
- Para el estudio de interacciones ADN-proteína utilizando huellas de DNasa I (libre de RNasa).
Para generar una biblioteca de fragmentos de inserción de ADN cortados aleatoriamente, se utiliza un tampón de reacción con Mn₂₄.